通过NGS或者质谱平台拿到序列后,面临的一个重要问题就是:选择什么数据库进行比对才能得到较好的分类鉴定结果呢?数据库中图谱的质量、数量都将直接影响鉴定的成功率与准确率。如原核的16S rDNA序列,真核的18S rDNA序列、ITS(ribosomalinternal transcribed spacer)序列等。 有两个关于人体微生物组的奠基性研究,一个是人类肠道宏基因组计划 MetaHIT,由欧盟发起,8个国家14个研究机构参与。华大基因承担了其中关键的测序与分析工作,从2008年1月1日到2012年6月30日,构建了第一个肠道微生物基因集,包含330万个基因,氮吹仪是近年来肠道微生物研究的里程碑。另一个是由美国国家卫生院发起的人类微生物组计划。从2008年到2013年,采集了人体各个部位共超过5000份样本进行了测序和深入的分析,绘制了人体相关的微生物图谱,并破解了3000种微生物前基因组,初步建立了人体共生微生物参考数据库。 其实针对每一类生物的主要marker序列都有相应的数据库以方便比对鉴定。如 RDP数据库(RibosomalDatabase Project)、SILVA数据库(一个包含细菌、古菌、真核rRNA基因序列的综合数据库)、Greengenes(针对细菌、古菌16S rRNA基因)数据库、 PR2(ProtistRibosomal Referencedatabase)数据库(针对真核微生物18SrRNA基因)等等。 目前国内仅梅里埃和BD两家外企,及北京毅新博创的微生物质谱获得CFDA认可。虽然外企大范围市场推广时间较短(约2-3年),市场总装机量不超过400台,但是根据2016年检验医学网的数据,2015年在细菌鉴定和药敏检测中,梅里埃的质谱仪已达到了2%的市占率,增长迅速氮吹仪。总体来看占据主导地位的还是梅里埃和西门子的传统检测系统,目前合并统计后生物梅里埃在细菌鉴定和药敏检测中市占率高达61.1%,西门子紧随其后为26.7%。
质谱技术在临床微生物菌种鉴定领域的应用,除了技术本身,更重要的是依赖于质谱菌种鉴定数据库。因此,数据库中图谱的质量、数量都将直接影响鉴定的成功率与准确率。由于病原微生物分布流行情况不同,实验室在原有数据库基础上可补充建立本地病原微生物的质谱指纹图谱库,提高鉴定成功率。 目前梅里埃和BD的产品均可以鉴定2000多种微生物,安图生物在微生物检测领域积累20多年,已开发出具有自主知识产权的中国本土化微生物菌株数据库,可鉴定超过1500种微生物。 反观NGS在微生物领域额应用,目前全球还没有相关领域的注册试剂获批。国外是通过LDT的方式开展。国内目前处在方法学的标准品验证阶段。由中检院负责,华大基因、博奥生物、达瑞生物和赛哲生物四家公司是第一批参与标准品验证的行业玩家。其中华大基因用自己的BGISEQ测序平台,博奥生物、达瑞生物两家用Thermo Fisher的NGS平台,赛哲生物用的是Illumina平台。 所谓标准品是行业对NGS方法学,即测序平台的验证。由中检院“出题”,构建一个由1000多种基因组成的样品“黑箱”,四家受试者在各自的平台上分析。检测准确度达到一定标准的,就把这种检测平台作为方法学的标准品,后续可以在这个平台上开发产品。毫无疑问,通过率先通过标准品验证的公司会在行业建立先发优势。 由于病原微生物分布流行情况不同,这些公开数据库不能完全满足临床检测需求。实验室在原有数据库基础上需补充建立本地病原微生物的质谱指纹图谱库,提高鉴定成功率。 2016年初,之江生物(834839.OC)发布公告称出资 50 亿韩元,约合 2,750 万元人民币,认购韩国 ChunLab公司390,625 股新增股份,增资后之江生物持有后者 12.93%的股权。ChunLab公司拥有一个庞大的、非公开的微生物数据库。我们预测之江生物的这个布局意味着即将会在微生物检测领域有所作为,也为未来业绩增长创造了很好的先发优势。氮吹仪的生产厂家哪家好
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