-./链的延伸终止在 %%.23处。 !!水浴氮吹仪双脱氧合成末端终止法 -./序列分析操作中要用四个反应管，每一管都加入 -./模板， -./聚合 酶，四种 %.23，其中一种 %.23是用同位素标记的。除此之外，每一管还要加入一种 %%.23，即 /管加入 %%/23，2管加入 %%223，4管加入 %%423，5管加入 %%523。以 /管为例，当模板上碱基是 2时，反应体系 中有两种碱基可与之配对： %/23和 %%/23。如果是 %/23与之配对，引物的延伸还能继续下去。如果是 %%/23与之配对，引物的延伸就会到此终止。 /管中会出现 长短不一，但总是终止在 /位的核苷酸链。另外三管中出现 的情形也如此，即四个反应管分别存在以四种不同核苷酸为 01末端的长度不等的核苷酸链。这四个反应管中核苷酸链的 总的结果是一系列长度只差一个核苷酸的 -./聚合链。聚 合反应结束后，把 ;管内的产物分别加到超薄的聚丙烯酰 胺—尿素变性凝胶板上电泳，这种电泳分辨能力可达到相差 一个核苷酸的水平，四条泳道形成不同的电泳条带。经过放 射自显影，从下向上读即是新合成链 71!01的碱基排列顺序 （图 89 <）。>*? 4&@A$#B法，该法是先用同位素 对 -./片段的末端进行标记，然后用专一的化学试剂对特 定的碱基进行化学修饰，经过修饰的碱基从糖环上脱落，同 时和该糖环相连的磷酸二酯键断

裂，产生在该修饰碱基处断 开的长短不一的 -./片段。硫酸二甲酯专一修饰鸟嘌呤，甲酸修饰嘌呤碱基，肼修饰嘧啶碱基，在有 .*5@存在的条件下，肼只修饰胞嘧啶。分别用上述化学试剂降解 -./，然后电泳。电泳条带从下向上读 即是待测 -./ 71!01的核苷酸序列（图 89 8:）。 第五节 !转基因动物、克隆动物和基因剔除技术 一、转基因动物 !!转基因动物（B#*+C,$+&’ *+&?*@C）是利用基因工程和胚胎工程技术，改变动物遗传性状的新方法，是将 外源基因导入动物的受精卵，再将受精卵植入到代孕动物的输卵管或子宫中培育的动物（图 89 88）。转 基因动物中的外源基因已与动物本身的基因组整合，外源基因随细胞分裂而增殖，在体内得到表达，并传 图 89 8:!化学修饰裂解法测序原理  第十七章 #基因技术#"! 给下一代。也有人先将外源基因导入精子或卵细胞，再让导入外源基因的精子或卵细胞受精，培育转基因 动物。 ##转基因动物能够创造医学研究需要的动物模型、改 良动物品质、培育动物新品种。例如，将大鼠的生长激 素基因导入小鼠受精卵培育的转基因小鼠体重是普通 小鼠的二倍，成为超级鼠。 ##人体内有许多种活性肽和生长因子，它们在体内的 生理功能十分重要，但含量极少，提取和纯化都很困难。 可利用转基因技术将人类的这些基因转入动物的受精 卵，培育转基因动物，从转基因动物的某些产物中提取 这些基因的产物。如将人类的基因转入奶牛，从牛奶里 提取人类基因的产物。或将人类基因转入鸡，从鸡蛋内 提取基因产物。这些转

基因动物就像工厂一样可以源 源不断的提供人类需要的产品，因此称其为动物工厂或 生物工厂。 ##外源基因能够转入动物，建立转基因动物，也可以 转入植物，建立转基因植物。以这些转基因生物为直接 食品或作为原料加工生产的食品为转基因食品。转基 因食品的出现有望帮助解决人们吃饭的难题。但对转 基因食品的安全性还没有取得共识，对目前应不应该把 转基因食品投放市场还存在着争论。 二、克隆动物 ##克隆是英语 $%&’(的音译，即无性繁殖。克隆动物 是生物体通过体细胞进行的无性繁殖以及由无性繁殖 形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。克隆 动物是多种生物技术结合的产物，是把细胞核转移到去 核的卵细胞中，培育新型生物品种的细胞工程技术。克 隆动物技术主要包括三个步骤。 # #!*制备成熟的卵细胞。 # #)*细胞核移植，将供体细胞的细胞核与去核的 卵细胞融合成一个杂合细胞。 # #+*将“核质融合”的卵细胞移植到借腹怀孕动 物的子宫发育直到出生（图 !" !)）。 ##克隆动物的遗传信息完全来自于提供细胞核的 动物，即克隆动物是供核动物的复制品。由此可见， 克隆动物与转基因动物不同。转基因动物是将外源 基因转入动物的受精卵内，产生后代个体的方式仍 然是有性繁殖，只不过后代细胞染色体内插入了外 源基因。克隆动物是将供体细胞核移入到去除了细 !*提取卵细胞； )*提取体细胞； +*卵细胞去核； ,*体细胞核转胞核的未受精卵细胞内，是细胞无性繁殖的产物。 入去核卵细胞； -*筛选；